К вопросу о пероральном применении тромболитика на основе иммобилизированных субтилизинов для лечения тромбозов

УДК 615.015.33

Аннотация

Резюме. Введение. Тромболитическая терапия с применением активаторов плазминогена достаточно эффективна, но сопря- жена с риском возникновения геморрагических осложнений и реализуется только внутривенным путём введения. Существует необходимость в пероральной тромболитической терапии. Среди возможных кандидатов для эффективного перорального фибринолиза/тромболизиса следует обратить внимание на сериновые протеиназы, не вызывающие сайт-специфического гидролиза факторов свёртывания крови. Необходимо изучить их энтеральную биодоступность и тромболитическую актив- ность. Цель исследования: изучить путь поступления сериновой протеиназы субтилизина в системный кровоток при пероральном применении, а также сравнить тромболитическую активность протеолитических ферментов трипсина, химо- трипсина и субтилизина. Материалы и методы. Проведено открытое сравнительное экспериментальное исследование в параллельных группах крыс по определению тромболитической активности изучаемых препаратов in vitro. Сформировано 4 группы животных: 3 для исследования лекарственных препаратов субтилизина, трипсина, химотрипсина и 1 контрольная. В каждой группе происходила инкубация фрагментированных тромбов с предполагаемым тромболитическим агентом. Для исследования всасывания иммобилизированного субтилизина (ИС) 30 крысам после срединной лапаротомии инту- бировали фрагмент тощей кишки для инфузии растворов. Для ИС, меченного флуоресцеин-5-изотиоцианатом (ФИТЦ), определены особенности всасывания из тощей кишки в систему кровь–лимфа. Меченный ИС экстрагировали из прилега- ющей к области интубации интерстициальной жидкости кишечника, слизистый слой которого был удален, и из паренхимы лимфатических узлов (I и II порядка). Для визуальной детекции абсорбции ИС на эпителии тощей кишки применили метод конфокальной микроскопии. Тромболитическая активность ИС, трипсина и химотрипсина исследована на фрагментиро- ванном тромбе. Результаты. In situ установлено, что ИС через 60 мин после начала инкубации в тощей кишке детектируется и в плазме крови и в лимфе (p < 0,01). Концентрация препарата в плазме крови из v. mesenterica (223,8 ± 39,8 мЕд/мл) более чем в 10 раз выше, чем в лимфе из цистерны грудного протока (19,27 ± 2,33 мЕд/мл). Снижение концентрации препарата в v. cauda (143,7±24,4 мЕд/мл) по сравнению с v. mesenterica (p<0,01) объясняется первичным метаболизмом в печени и последу- ющим почечным клиренсом. При конфокальной микроскопии хорошо видно, что ИС активно абсорбируется на слизистой тонкого кишечника с накоплением в толще крипт и поступлением в сосудистую сеть. В экспериментах in vitro показано, что в условиях нормального или компенсированного кислотно-основного состояния крови достоверно наибольшую тром- болитическую активность имеет препарат ИС (p < 0,05 по сравнению с контролем, трипсином и химотрипсином). За 30 мин инкубации ИС уменьшает площадь тромба более чем на 20%. Заключение. Энтеральная биодоступность ИС обеспечива- ется за счёт активной абсорбции на слизистой тонкого кишечника, прямого поступления в сосуды портальной системы и накопления в лимфатическом русле с дальнейшим дренажем в системный кровоток. Тромболитическое действие ИС существенно превосходит трипсин и химотрипсин, что позволяет считать малоперспективным разработку пероральных тромболитиков на основе трипсина и химотрипсина.

Литература:

1. Российские клинические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике венозных тромбоэмболических осложнений (ВТЭО). Флебология. 2015;9(4–2). 52 с.

2. Стойко Ю.М., Кириенко А.И., Илюхин Е.А. и др. Диагностика и лечение тромбофлебита поверхностных вен конечностей. Рекомендации Ассоциации флебологов России. Флебология. 2019;13(2):78–97. DOI: 10.17116/flebo20191302178.
3. Временные методические рекомендации профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID­19). Версия 12 (21.09.2021). М.: Министерство здраво- охранения Российской Федерации, 2021. 232 с.
4. Gómez­Mesa J.E., Galindo­Coral S., Montes M.C., Martin A.J.M. Thrombosis and coagulopathy in COVID­19. Curr Probl Cardiol. 2021;46(3):100742. DOI: 10.1016/j.cpcardiol.2020.100742.
5. J., Hong H., Ohana M. et al. Pulmonary embolism and deep vein thrombosis in COVID­19: a systematic review and meta­analysis. Radiology. 2021;298(2):E70–E80. DOI: 10.1148/ radiol.2020203557.
6. Manolis A.S., Manolis T.A., Manolis A.A. et al. COVID­19 Infection: viral macro­ and micro­vascular coagulopathy and thromboem­ bolism/prophylactic and therapeutic management. J Cardiovasc Pharmacol Ther. 2021;26(1):12–24. DOI: 10.1177/1074248420958973.
7. Шайдаков Е.В., Царев О.И. Тромболизис в лечении острого тромбоза глубоких вен нижних конечностей. Флебология. 2011;5(4):80–6.
8. Watson L., Broderick C., Armon M.P. Thrombolysis for acute deep vein thrombosis. Cochrane Database Syst Rev. 2016;11(11): CD002783. DOI: 10.1002/14651858.CD002783.pub4. 

9. Вышлов Е.В., Рябов В.В. Коронарная реперфузия при остром инфаркте миокарда. Томск: НИИ кардиологии, Томский НИМЦ, 196 с. 
10. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. А.Н. Миронова. М.: Гриф и К, 2012. 944 c.

11. Кузнецов А.В. Способ забора лимфы у животных из централь­ ного грудного протока. Патент RU No 2040205 С1 от07.1995. 4 с.

12. Bromage D.I., Taferner S., He Z. et al. Stromal cell­derived factor­1α signals via the endothelium to protect the heart against ischaemia­ reperfusion injury. J Mol Cell Cardiol. 2019;128:187–97. DOI: 10.1016/j.yjmcc.2019.02.002.
13. Barbero N., Barolo C., Viscardi G. Bovine serum albumin biocon­ jugation with FITC. J Chem Educ. 2016;4(4):80–5. DOI: 10.12691/ wjce­4–4–3.
14. Song N., Ma J., Meng X. et al. Heat shock protein 70 protects the heart from ischemia/reperfusion injury through inhibition of p38 MAPK signaling. Oxid Med Cell Longev. 2020;2020:3908641. DOI: 1155/2020/3908641.