Методические подходы к оценке функциональной активности тромбоцитов при воздействии антиагрегантных препаратов
УДК 616.15:612.115
Аннотация
Резюме. Введение. Адекватный контроль функциональной активности тромбоцитов, в том числе при воздействии антиагре- гантных препаратов, является нерешенной проблемой лабораторной диагностики. К наиболее часто используемым методам определения функциональной активности тромбоцитов относятся оптическая агрегатометрия и проточная цитометрия. Цель исследования: оценить изменения функциональной активности тромбоцитов под влиянием антиагрегантных препаратов, используя методы оптической агрегатометрии и проточной цитометрии. Материалы и методы. В проспективном иссле- довании приняли участие 22 здоровые женщины фертильного возраста (26,0±4,7 лет). Кровь отбирали из локтевой вены в вакутейнер с антикоагулянтом — цитратом натрия в соотношении кровь: антикоагулянт = 9:1. В качестве антиагрегантов использовали ацетилсалициловую кислоту (АСК) и эптифибатид. С помощью метода оптической агрегатометрии оцени- вали степень и скорость агрегации тромбоцитов (АТ). Методом проточной цитометрии оценивали экспрессию P-селектина (CD62P), гликопротеина GPIIb/IIIa (CD41а) и образование тромбоцитарно-лейкоцитарных комплексов. Результаты. Опре- деление функциональной активности АДФ-индуцированных тромбоцитов под действием АСК выявило снижение скорости и степени их агрегационной активности и снижение уровня экспрессии CD41a и CD62P. При обработке тромбоцитов препа- ратом эптифибатид установлено увеличение экспрессии CD62P и CD41a и выраженное подавление скорости и степени АТ. Добавление АСК не оказывало заметного влияния на АДФ-индуцированное образование комплексов тромбоцитов с лейко- цитами. Напротив, в присутствии эптифибатида наблюдали более интенсивную АТ с лейкоцитами. Заключение. Оценку функциональной активности тромбоцитарного звена гемостаза необходимо проводить с учетом всех этапов активации тромбоцитов и их участия в межклеточных взаимодействиях. Расширение подходов к оценке эффективности антиагре- гантной терапии лабораторными методами имеет большое значение для поиска безопасных и эффективных методов лечения пациентов с тромбофилическими состояниями на различных этапах их развития.
Для цитирования: Чепанов С.В., Павлов О.В., Опарина Т.И., Кудрявцева Т.А., Орлова Е.С., Милютина Ю.П., Кахиани М.И., Сельков С.А. Методические подходы к оценке функциональной активности тромбоцитов при воздействии антиагрегантных препаратов. Тромбоз, гемостаз и реология. 2022;(4):75–84.
Литература
- Мазуров А.В. Физиология и патология тромбоцитов. М.: Литтерра, 2011. 480 с.
- Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. М.-Тверь: ООО «Триада», 2005. 227 с.
- Сироткина О.В., Ласковец А.Б., Андоскин П.А. и др. Увеличение количества рецепторов GP IIB-IIIA и P2Y12 в тромбоцитах при активации — свидетельство синтеза белков de novo. Молекулярная биология. 2016;50(1):128–35. DOI: 10.7868/ S0026898416010183.
- Шитикова А. С. Тромбоцитопатии, врожденные и приобретенные. Под ред. Л. Н. Папаян, О. Г. Головиной. СПб.: ООО «Бастион», 2008. 320 с.
- SharmaP.,SachdevaM.S.,KumarN.etal.Acomparativestudy between light transmission aggregometry and flow cytometric platelet aggregation test for the identification of platelet function defects in patients with bleeding. Blood Res. 2021;56(2):109– 18. DOI: 10.5045/br.2021.2020232.
- Althaus K., Zieger B., Bakchoul T., Jurk K. Standardization of light transmission aggregometry for diagnosis of platelet disorders: An inter-laboratory external quality assessment. Thromb Haemost. 2019;119(7):1154–61. DOI: 10.1055/s-0039–1688791.
- FrelingerA.L., Rivera J., David E. et al. Consensus recommendations on flow cytometry for the assessment of inherited and acquired disorders of platelet number and function: Communication from the ISTH SSC Subcommittee on Platelet Physiology. J Thromb Haemost. 2021;19(12):3193–202. DOI: 10.1111/jth.15526.
- Селютин А.В., Чепанов С.В., Павлов О.В. и др. Роль тромбоцитарно-моноцитарных комплексов периферической крови в репродуктивных процессах и методы их исследования. Акушерство и гинекология. 2021;(8):50–9. DOI: 10.18565/ aig.2021.8.50–58.
- Шабалина А.А., Ройтман Е.В., Танашян М.М. Сравнение двух методов лабораторной оценки агрегации тромбоцитов и резистентности к антиагрегантной терапии. Тромбоз, гемостаз и реология. 2019;(3):64–71. DOI: 10.25555/THR.2019.3.0892.
- Ермаков А.И. Гайковая Л.Б., Вавилова Т.В., Сироткина О.В. Определение референтных интервалов экспрессии P-селектина на тромбоцитах. Профилактическая и клиническая медицина. 2020;(4):87–92. DOI: 10.47843/2074– 9120_2020_4_87.
- Granja T., Schad J., Schüssel P. et al. Using six-colour flow cytometry to analyse the activation and interaction of platelets and leukocytes — A new assay suitable for bench and bedside conditions. Thromb Res. 2015;136(4):786–96. DOI: 10.1016/j. thromres.2015.07.009 0049–3848.
- Панченко Е.П. Современные представления о месте ацетилсалициловой кислоты в лечении больных с различными проявлениями атеротромбоза. Атеротромбоз. 2021;1:89–105. DOI: 10.21518/2307–1109–2021–11–1–89–105.
- Терещенко А.С., Меркулов Е.В., Самко А.Н. Применение ингибиторов гликопротеиновых IIb/IIIa рецепторов у пациентов с инфарктом миокарда с подъемом сегмента ST и первичным чрескожным коронарным вмешательством. Рациональная фармакотерапия в кардиологии. 2019;15(6):918–27. DOI: 10.20996/1819–6446–2019–15–6–918–927.
- Scholz T., Zhao L., Temmler U. et al. The GPIIb/IIIa antagonist eptifibatide markedly potentiates platelet-leukocyte interaction and tissue factor expression following platelet activation in whole blood in vitro. Platelets. 2002;13(7):401–6. DOI:10.1080/0953710021000024367.
- Zhao L., Bath P., May J. et al. P-selectin, tissue factor and CD40 ligand expression on platelet-leucocyte conjugates in the presence of a GPIIb/IIIa antagonist. Platelets. 2003;14(7–8):473–80. DOI: 10.1080/09537100310001638562.
- Simon D.I., Chen Z., Xu H. et al. Platelet glycoprotein Ibα is a counterreceptor for the leukocyte integrin Mac-1 (CD11b/CD18). J Exp Med. 2000;192(2):193–204. DOI: 10.1084/jem.192.2.193.
- Gils J.M., Zwaginga J.J., Hordijk P.L. Molecular and functional interactions among monocytes, platelets, and endothelial cells and their relevance for cardiovascular diseases. J Leukoc Biol. 2009;85(2):195–204. DOI: 10.1189/jlb.0708400.
- Haselmayer P., Grosse-Hovest L., von Landenberg P. et al. TREM-1 ligand expression on platelets enhances neutrophil activation. Blood. 2007;110(3):1029–35.
- Hur J., Jang J.H., Oh I.Y. et al. Human podoplanin-positive monocytes and platelets enhance lymphangiogenesis through the activation of the podoplanin/CLEC-2 axis. Mol Ther. 2014;22(8):1518– 529. DOI: 10.1038/mt.2014.61.
Ключевые слова
тромбоциты, тромбоцитарно-лейкоцитарные комплексы, P-селектин, проточная цитометрия, агрегатометрия